Efecto antiinflamatorio y antioxidante in vitro de Curcuma longa sobre macrófagos murinos durante la infección por Helicobacter pylori

RESUMEN Introducción: La colonización por Helicobacter pylori produce una inflamación en la mucosa gástrica con el consecuente desarrollo de enfermedades gastroduodenales. Frente a altas tasas de resistencia antimicrobiana y la ausencia de una vacuna en humanos, la alternativa ha sido la búsqueda de extractos de plantas con propiedades antimicrobiana, antiinflamatoria, antioxidante, antifúngica y anticancerígena como la Curcuma longa. Sin embargo, al ser una especie introducida y adaptada a las condiciones climáticas del país, son necesarios los estudios preclínicos que avalen su potencial antiinflamatorio y antioxidante. Objetivo: Evaluar el efecto del extracto de C. longa sobre macrófagos peritoneales infectados con H. pylori. Métodos: Para evaluar el efecto antiinflamatorio y antioxidante del extracto de C. longa sobre macrófagos murinos infectados por H. pylori, se evaluaron diferentes concentraciones del extracto y relaciones de bacteria, y se evaluó la muerte celular mediante DAPI. Se determinó la producción de óxido nítrico, peróxido de hidrógeno y los niveles de la interleucina-1β. Resultados: La viabilidad del macrófago se afectó frente a concentraciones de 100 µg/mL del extracto de cúrcuma y a partir de 25 bacterias/macrófago. Al combinar las diferentes concentraciones del extracto con las multiplicidades bacterianas se observó una reducción en los niveles de H2O2 e IL-1β; sin embargo, la reducción del óxido nítrico se observó en el rango de 6,25-50 µg/mL del producto natural. Conclusiones: El extracto de cúrcuma cubano mostró potencial antioxidante y antiinflamatorio al disminuir la citotoxicidad celular y la producción de especies reactivas del oxígeno en macrófagos peritoneales.

ABSTRACT Introduction: Colonization by Helicobacter pylori causes inflammation of the gastric mucosa with the consequent development of gastroduodenal diseases. In view of the high antimicrobial resistance rates and the absence of a vaccine for humans, the alternative has been to search for plant extracts with antimicrobial, anti-inflammatory, antioxidant, antifungal and anticancer properties. An example is Curcuma longa. However, being as it is a species introduced and adapted to the country's climate conditions, it is necessary to conduct preclinical studies demonstrating its anti-inflammatory and antioxidant potential. Objective: Evaluate the effect of a C. longa extract on peritoneal macrophages infected by H. pylori. Methods: With the purpose of describing the anti-inflammatory and antioxidant effect of C. longa on murine macrophages infected by H. pylori, an evaluation was conducted of various extract concentrations and bacterial relationships, while cell death was assessed by DAPI. Determination was made of nitric oxide and hydrogen peroxide production, as well as of interleukin-1β levels. Results: Viability of the macrophage was affected in the presence of 100 µg/ml concentrations of the turmeric extract and as from 25 bacteria / macrophage. When different concentrations of the extract were combined with the bacterial multiplicities, a reduction was observed in H2O2 and IL-1β levels. However, nitric oxide reduction was observed within the range of 6.25-50 µg/ml of the natural product. Conclusions: The Cuban turmeric extract was found to have antioxidant and anti-inflammatory potential by reducing cell cytotoxicity and the production of reactive oxygen species in peritoneal macrophages.

Metodología para la obtención y evaluación de un extracto proteínico de una cepa autóctona de Helicobacter pylori / Methodology to obtain and evaluate a protein extract of an autochthonous Helicobacter pylori strain

Helicobacter pylori es una bacteria gram negativa que posee numerosos antígenos que juegan un importante papel en la patogénesis de las enfermedades gastroduodenales. Debido a la necesidad de métodos de diagnóstico estandarizados con antígenos locales u autóctonos nos propusimos el diseño de una estrategia para la obtención de extractos de antígenos con reactividad frente a sueros de pacientes infectados por H. pylori. Dos cepas de H. pylori, una autóctona (IPK196A) y una de referencia ATCC 43504, se cultivaron en un medio líquido modificado. Se sometieron a los protocolos de ruptura por ultrasonido aplicándose tres variantes de precipitación y al fraccionamiento celular mediante ultracentrifugación diferencial. Los extractos proteínicos se visualizaron mediante electroforesis en gel de poliacrilamida y se transfirieron para la detección de antígenos inmunorreactivos a sueros de pacientes con infección por H. pylori e individuos sanos. La variante de ultrasonido y precipitación con Coomasie fue la más efectiva para concentrar las muestras. El método de ultracentrifugación mejoró la resolución de las proteínas reactivas y permitió separarlas según su localización subcelular. El sistema de transferencia húmedo fue ideal para la inmunodetección de los antígenos obtenidos por ultrasonido mientras que el sistema semiseco permitió detectar las proteínas de membrana obtenidas por ultracentrifugación diferencial. La introducción de una metodología en el laboratorio para la obtención y evaluación de extractos proteínicos antigénicos a partir de cepas autóctonas de H. pylori, constituye la antesala para el diseño de futuros diagnosticadores y candidatos vacunales(AU)

Helicobacter pylori is a gram-negative spiral-shaped bacterium, which has many antigens that play an important role in the pathogenesis of gastroduodenal diseases. Due to the lack of standardized methods from native or autochthonous antigens, we proposed in this study, the design of a strategy for extracting and obtaining immunoreactive antigens against H. pylori infected-patient sera. Two H. pylori strains, one autochthonous (IPK196A) and one reference ATCC 43504, were cultured in a modified liquid medium. Both strains were subjected to the ultrasound rupture protocols applying three precipitation variants and cell fractionation by differential ultracentrifugation. Protein extracts were visualized by polyacrylamide gel electrophoresis and transferred for the detection of immunoreactive antigens to sera from patients with H. pylori infection and healthy individuals. The precipitation with Coomasie was the most effective variant. The ultracentrifugation extraction method optimized the resolution of the proteins, which could be separated according to their subcellular location. The wet transfer system was ideal for the immunodetection of the antigens obtained by ultrasound, while the semi-dry system allowed detecting the membrane proteins by differential ultracentrifugation. The introduction of a methodology in the laboratory for obtaining and evaluating antigenic antibodies from autochthonous strains of H. pylori, is the prelude to the design for future diagnostics and vaccine candidates(AU)

Evaluación del desempeño de dos pruebas para la detección de antígeno de Helicobacter pylori en heces / Evaluation of the accuracy of two stool antigen tests for Helicobacter pylori infection

Introducción: la detección de antígeno en heces se ha considerado una prueba prometedora para el diagnóstico de la infección por Helicobacter pylori. Para su introducción en la práctica médica, es un requisito indispensable demostrar el desempeño adecuado del método en la población de estudio. Objetivo: evaluar la capacidad diagnóstica de los sistemas comerciales ELISA SD y SD BIOLINE, del fabricante Standard Diagnostics, Corea, en pacientes cubanos con síntomas gastroduodenales. Métodos: se evaluaron 101 muestras de heces de pacientes previamente clasificados como H. pylori positivos y negativos por las pruebas de referencia de histología y prueba rápida de la ureasa. Se calcularon los parámetros de desempeño de ambos sistemas diagnósticos por el programa EPIDAT 3.1. Resultados: la sensibilidad para los sistemas ELISA SD y SD BIOLINE fue de 85,25 por ciento y 75,41 por ciento, respectivamente. La especificidad para ambos fue de 92,50 por ciento. Los valores predictivos positivos y negativos, los índices de validez y de Youden y la confiabilidad diagnóstica de ambas pruebas fueron satisfactorios. Conclusiones: Los sistemas evaluados exhibieron un desempeño comparable con la histología y la prueba rápida de ureasa para la detección activa de la infección por H. pylori, lo que demuestra su utilidad para el diagnóstico y el manejo oportuno del paciente, sin la necesidad de emplear pruebas invasivas(AU)

Introduction: stool antigen tests have been considered to be promising for the diagnosis of Helicobacter pylori infection. For their incorporation into medical practice, it is indispensable to demonstrate their accuracy in a study population. Objective: evaluate the diagnostic capacity of the commercial systems ELISA SD and SD BIOLINE, Standards Diagnostics, Korea, in Cuban patients with gastroduodenal symptoms. Methods: an evaluation was conducted of 101 stool samples from patients previously classified as H. pylori positive and negative by reference histological tests and the rapid urease test. Estimation was made of performance parameters for both diagnostic systems using the software EPIDAT 3.1. Results: Sensitivity for the systems ELISA SD and SD BIOLINE was 85.25 percent and 75.41 percent, respectively. Specificity for both was 92.50 percent. Positive and negative predictive values, validity and Youden's indices, and diagnostic reliability were satisfactory for both tests. Conclusions: the systems evaluated were found to have a performance level comparable with histological tests and the rapid urease test for active detection of H. pylori infection. This confirms their usefulness for the diagnosis and timely management of patients without having to use invasive tests(AU)

Colonización vaginal/rectal por Streptococcus agalactiae en gestantes de Melena del Sur, Cuba / Vaginal and rectal Streptococcus agalactiae colonization in pregnant women from Melena del Sur municipality in Cuba

Introducción: en Cuba se desconoce el peso de la colonización vaginal o rectal por Streptococcus agalactiae o estreptococo ß-hemolítico grupo B (SGB) como factor de riesgo para el desarrollo de sepsis neonatal precoz. Objetivo: determinar la prevalencia de colonización vaginal/rectal por SGB entre la población de gestantes del municipio Melena del Sur, Mayabeque. Métodos: se realizó un estudio observacional de corte transversal entre febrero-agosto 2011, en el que se incluyeron 120 gestantes (35-37 semanas). Se obtuvieron muestras vaginales y rectales que se cultivaron en caldo Todd Hewitt y medio Granada y se calculó la sensibilidad y especificidad de ambos medios de cultivo para la recuperación de SGB. Se hizo seguimiento de las embarazadas hasta el momento del parto para conocer acerca de la aparición de factores de riesgo para el desarrollo de sepsis neonatal, sobre la imposición de profilaxis antibiótica intraparto y si se produjeron casos de sepsis neonatal (tipo y evolución). Resultados: la especificidad lograda con el medio Granada para el aislamiento de SGB fue superior (94,57 %) pero la sensibilidad fue de solo 60,71 %; la combinación de su empleo y el caldo Todd Hewitt permitió la demostración de colonización por SGB en el 27,5 % de las gestantes. Se constató la administración de tratamiento profiláctico a las embarazas colonizadas en las que se presentaron factores de riesgo en el momento del parto y se produjeron solo cuatro casos de sepsis neonatales, lo que realza el valor de esta estrategia en la intercepción de la transmisión vertical.

Introduction: the impact of vaginal or rectal colonization by Streptococcus agalactiae or group B hemolytic streptococcus as risk factor for the development of early neonatal sepsis is still unknown in Cuba. Objective: to determine the prevalence of group B hemolytic streptococcus colonization of the vagina and the rectum among the pregnant women of the Melena del Sur municipality in Mayabeque province, Cuba. Methods: observational and cross-sectional study conducted from February to August 2011, which covered 120 pregnant women (35 to 37 weeks of gestation). Vaginal and rectal samples were taken to be cultured in ToodHewitt broth and grenade medium and the sensitivity and specificity of both culturing media were then calculated for recovery of Group B hemolytic streptococcus. The pregnant women were followed-up up to the delivery time so as to learn about the occurrence of risk factors for developing neonatal sepsis, the application of antibiotic prophylaxis intrapartum and the occurrence of cases of neonatal sepsis (type and progress). Results: the specificity of the grenade medium for Group B streptococcus was higher (94.57 %), but sensitivity was just 60.71 %. The combination of grenade medium plus Todd Hewitt broth allowed showing the Group B hemolytic streptococcus colonization in 27.5 % of pregnant women. It was then confirmed that prophylactic treatment was given to colonized pregnant women who presented with risk factors at the time of delivery and that there were just four neonatal sepsis cases, which stressed the value of this strategy in halting the vertical transmission.

Detección de Chlamydia trachomatis en muestras de exudado endocervical mediante una prueba de diagnóstico rápido y dos técnicas de reacción en cadena de la polimerasa / Detection of Chlamydia trachomatis in endocervical swab using rapid test and two reaction techniques polymerase chain

Introducción: Chlamydia trachomatis es el principal agente bacteriano que produce infecciones de transmisión sexual.Objetivo: detectar la presencia de C. trachomatis utilizando una prueba de diagnóstico rápido y compararla con la reacción en cadena de la polimerasa (RCP).Métodos: se procesaron 50 muestras de exudado endocervical, de mujeres sintomáticas del municipio 10 de Octubre. A las muestras se les aplicó la prueba Chlamy-check-1, un ensayo de RCP del gen del plásmido críptico y una RCP en tiempo real (RCP-TR) de la proteína mayor de la membrana externa (MOMP) de C. trachomatis, que fue utilizada como referencia. Se calculó, sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo (VPP) y negativo (VPN).Resultados: de las muestras estudiadas, 44 resultaron positivas por la prueba rápida, mientras que por la RCP del plásmido críptico solo 3 muestras (6 porciento) amplificaron. Al aplicar la RCP-TR, 4 muestras (8 porciento) se confirmaron como positivas, coincidiendo 3 por los tres métodos de diagnóstico. Al evaluar la prueba Chlamy-check-1 frente a la prueba de referencia se observó una sensibilidad de 100 porciento, mientras que la especificidad fue de 13 porciento, así como un VPP de 9,1 porciento y VPN de 100 porciento. Por el contrario, la RCP del plásmido críptico mostró una sensibilidad y especificidad de 75 y 100 porciento, respectivamente; un VPP de 100 porciento y VPN de 97,9 porciento.Conclusiones: se obtuvo diferencia entre los porcentajes de positividad detectados con la prueba rápida, y las técnicas de RCP. La baja especificidad de la prueba rápida indica la necesidad de realizar estudios de evaluación de este estuche diagnóstico.

Introduction: Chlamydia trachomatis is the leading bacterial agent that causes sexually transmitted infections.Objective: to detect the presence of C. trachomatis using a rapid test and compare it with the chain reaction (PCR).Methods: 50 endocervical exudates taken from symptomatic women were processed in Diez de October municipality. The samples were applied the Chlamy-check-1 test, a PCR assay of the cryptic plasmid gene and a real-time PCR (RT-PCR) of major outer membrane protein (MOMP) of C. trachomatis which was used as reference. Sensitivity, specificity, positive (PPV) and negative (NPV) predictive value were calculated.Results: 44 samples were positive by the rapid test, whereas only three samples (6 percent) amplified by cryptic plasmid PCR. Applying RT-PCR, 4 samples (8 percent) were confirmed as positive, 3 samples matched with three diagnostic methods. In assessing the Chlamy-check-1 versus the reference test, 100 percent of sensitivity was observed, while the specificity was 13 percent> Also PPV was 9.1percent and NPV was 100 percent. On the contrary, the cryptic plasmid PCR had 75 and 100 percent of sensitivity and specificity respectively, 100 percent PPV and 97.9 percent NPV.Conclusions: the difference was obtained between the percentages of positivity detected with both the rapid test, and CPR techniques. The low specificity of the rapid test indicates the need for further studies to evaluate this diagnostic kit.

Rol del equipo de investigación cubano en la identificación del origen de la epidemia de cólera en Haití / Role played by the Cuban research team in the identification of the origin of the cholera epidemic in Haiti

Objetivo: realizar la investigación epidemiológica de terreno acerca de la aparición de casos de diarreas agudas acuosas profusas y el control epidemiológico correspondiente. Métodos: se efectuó el análisis del brote de esta enfermedad con la participación del personal de salud cubano que laboraba en la comuna de Mirebalais, y se intercambiaron informaciones y criterios con el Director Departamental de Salud de Haití. Con toda la información recopilada, se comenzó la investigación epidemiológica de este evento de salud que estaba ocurriendo. Se elaboró la cronología de la aparición de los casos de la enfermedad en la comuna de Mirebalais, del Departamento Centro. Se inspeccionaron las áreas de hospitalización de los enfermos y se comprobó su estado clínico. Se dictaron otras medidas para la prevención y el control de otros casos similares. Fueron visitados, inspeccionados y analizados por el equipo de investigación cubano los asentamientos donde aparecieron casos o fallecidos por el evento epidemiológico y se efectuó la investigación ambiental en el terreno. Resultados: la rápida y oportuna alerta emitida por la brigada médica cubana sobre el aumento inusual de casos de diarreas agudas acuosas profusas permitió realizar la investigación y establecer las medidas para la prevención y el control del brote epidemiológico por el equipo de investigación cubano. Conclusiones: Al equipo médico cubano le corresponde el mérito de haber identificado precozmente el verdadero lugar donde se originaron y aparecieron los primeros casos de la epidemia de cólera en Haití.

Objective: The purpose of this study was to conduct field epidemiological research into the appearance of profuse acute watery diarrhea and the corresponding epidemiological control. Methods: An analysis was made of the outbreak of this disease with the participation of Cuban health personnel working in the commune of Mirebalais. Data and criteria were exchanged with the Haitian Departmental Director of Health. When all the required information had been gathered, the epidemiological research started. A chronology was developed of the occurrence of cases of the disease in the commune of Mirebalais, in the Central Department. Hospitalization areas were inspected and their clinical status checked. Other measures were instructed aimed at the prevention and control of similar cases. The Cuban research team visited, inspected and examined the settlements with cases or deaths caused by the epidemiological event, and a field environmental analysis was conducted. Results: The swift and timely alert issued by the Cuban medical brigade about the unusual increase in cases of profuse acute watery diarrhea made it possible to conduct the research and adopt the measures required to prevent and control the epidemiological outbreak. Conclusions: The Cuban research team had the merit of identifying at an early stage the origin and the true place where the first cholera cases appeared during the Haiti epidemic.

Cólera en Haití: lecciones aprendidas por la Brigada Médica Cubana / Cholera in Haiti: lessons learned by the Cuban Medical Brigade

El libro relata la experiencia de la Brigada Médica Cubana en Haití, es el resultado del trabajo práctico en el terreno desde una posición científica avalada por toda la experiencia internacional y en Cuba para la prevención y control del cólera, el uso en los servicios de salud y la investigación. Constituye una herramienta de gran utilidad para los profesionales de la salud sobre la actualización del Plan de Prevención y Control del Cólera.

Serotipos de Streptococcus pneumoniae en Cuba y progresión de la resistencia a la penicilina / Streptococcus pneumoniae serotypes in Cuba and progression of resistance to penicilina

INTRODUCCIÓN: en Cuba, a partir de 2006, ha sido difícil establecer la incidencia real de las meningitis bacterianas y otras enfermedades invasivas por Streptococcus pneumoniae, como consecuencia del bajo porcentaje de aislamiento e identificación de este agente en la red de laboratorios de microbiología del país. OBJETIVO: alertar sobre la necesidad de revitalizar la vigilancia activa de la enfermedad neumocócica invasiva, epidemiológica y microbiológica, fundamentalmente las meningitis y neumonías, en la etapa previa a la vacunación. MÉTODOS: se compararon la circulación de los serogrupos/serotipos capsulares y la susceptibilidad a penicilina de los aislamientos de S. pneumoniae responsables de infecciones invasivas, en dos períodos de la vigilancia: años 1994-2006 y 2007-2009. RESULTADOS: los serogrupos más frecuentes fueron: 3, 6, 7, 9, 14, 17, 18, 19, 20 y 23, pero se constató durante el segundo período de estudio, la circulación de otros no contenidos en las vacunas conjugadas disponibles comercialmente (serogrupo 15) y asociados a resistencia a antimicrobianos (serotipo 5). Por otra parte, se puso de manifiesto un incremento de la resistencia a la penicilina. CONCLUSIONES: para garantizar una alta efectividad con la inclusión en el calendario de vacunación infantil en Cuba, de alguna de las vacunas conjugadas contra S. pneumoniae, se impone el estudio de un número más representativo de aislamientos. Esto también permitirá hacer una correcta evaluación de la tendencia al incremento de la resistencia a la penicilina y adoptar guías de tratamiento adecuadas en el medio cubano.

INTRODUCTION: since 2006 in Cuba, there has been difficult to determine the actual incidente of bacterial meningitis and other invasive diseases caused by Streptococcus pneumoniae, as a result of the low percentage of isolation and identification of this agent in the domestic microbiology lab network. OBJECTIVE: to warn of the need of revitalizing the active surveillance of invasive, epidemiological and microbiological pneumoccocic diseases, mainly meningitis and pneumoniae in the phase prior to vaccination. METHODS: a comparison was made on the circulation of capsulary serogroups/serotypes and the invasive infection-causing S. pneumoniae isolates susceptibility to penicilline in two periods: 1994-2006 and 2007-2009. RESULTS: the most frequent serogroups were 3, 6, 7, 9, 14, 17, 18, 19, 20 and 23; however, in the second period, it was observed that others not contained in the available conjugate vaccines (serogrup 15) and associated to antimicrobial resistance (serotype 5) were circulating. On the other hand, increased resistance to penicilline was evident. CONCLUSIONS: it is required to study a more representative number of isolates in order to assure high effectiveness with the incorporation of some S. pneumoniae conjugate vaccines in the Cuban infant vaccination schedule. This will also allow duly assessing increased resistance to penicilline and adopting therapeutical guidelines suited to the Cuban setting.

Caracterización de cepas de haemophilus influenzae mediante fermentación de azúcares / Characterization of Haemophilus influenzae by carbohydrate fermentation

Se caracterizaron 64 cepas de haemophilus influenzae circulantes en Ciudad de la Habana durante 1 a por el método de fermentación de azúcares, por primera vez en Cuba. El patrón fermentativo D fue el más frecuentemente encontrado. Los patrones D y G en conjunto constituyeron el 72 por ciento del total de cepas estudiadas. La combinación de la fermentación de azúcares con el serotipaje y el biotipaje permitió una mayor diferenciación de las cepas (14 grupos). Los patrones A, B, C y F aparecieron en niños mayores de 6 meses y el G en el grupo de 6 a 18 meses. En la meningoencefalitis bacteriana predominan los patrones D y G, existió una mayor heterogeneidad en las cepas aisladas de infecciones respiratorias agudas. Se señalan algunas ventajas de este método de subtipificación de cepas de Haemophilus influenzae como son: la sencillez, facilidad de realizar e interpretar y no requerir de un personal calificado ni de un laboratorio especializado para su ejecución

Uretritis por Haemophilus influenzae serotipo b. Reporte de un caso / Urethritis due to serotype B Haemophilus influenzae. Report of one case

Se presenta un caso de un paciente con antecedentes de esquistosomiasis haematobium, procedente de Mozambique, que ingresa en el Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kouri" por presentar molestias al orinar y secresion uretral purulenta. Se aislo Haemophilus influenzae serotipo b, biotipo IV, de la uretra. La cepa resulto ser sensible a la ampicillina, cloranfenicol, ceftriaxona y norfloxacina y resistente a la tetraciclina y eritromicina. El paciente evoluciono hacia la curacion luego de recibir tratamiento con norfloxacina. Se realiza un comentario sobre el papel de este microorganismo como patogeno de transmision sexual

Estudio de la susceptibilidad de neisseria meningitidis a diferentes agentes antimicrobianos (enero 1990-diciembre 1992) / Study of the susceptibility of neisseria meningitidis a different agents antimicrobials (january 1990-december 1992)

Se estudiaron 253 cepas de Neisseria meningitidis aisladas de enfermos procedentes de todas las provincias de Cuba y recibidas en el Laboratorio Nacional de Referencia de Meningococo del Instituto de Medicina Tropical "Pedro Kouri" de la ciudad de La Habana, en el período comprendido desde enero de 1990 a diciembre de 1992. Se determino la susceptibilidad antimicrobiana por el método de dilución en placas de agar (concentración inhibitoria mínima) frente a los siguientes antibióticos de uso terapéutico y profiláctico: penicilina, ampicilina, clorafenicol, rifampicina y la resistencia a la sulfadiacina. El 56 por ciento de las cepas resultó ser moderadamente resistente a la penicilina, así como el 68,7 por ciento; 61,6 por ciento y 57,7 por ciento, en relación con el cloramfenicol, ampicilina y rifampicina, respectivamente. Aparecieron cepas sensibles (8,4 por ciento) y moderadamente resistentes (16,9 por ciento) a la sulfadiazina sódica